期刊简介
本杂志于1988年7月创刊，属学术类期刊，办刊宗旨是面向临床、面向基层、注重实用，致力于提高我国临床神经病学医师的专业理论及诊疗水平。
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首页>临床神经病学杂志
- 杂志名称：临床神经病学杂志
- 主管单位：南京医科大学
- 主办单位：南京医科大学附属脑科医院
- 国际刊号：1004-1648
- 国内刊号：32-1337/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：国家期刊奖期刊收录：万方收录(中), 文摘与引文数据库, 知网收录(中), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
RNA 干扰抑制大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原表达的实验研究
和姬苓；孙洪英；杨国安；徐莹；敖媛媛；张佳；刘晶
关键词：RNA干扰, 基因沉默, 内皮细胞, 血管紧张素原, 缺血性脑血管疾病
摘要：目的 研究RNA干扰技术对大鼠主动脉内皮细胞血管紧张素原( AGT )表达的抑制. 方法 构建携带AGT基因特异短发夹RNA( shRNA)编码序列的质粒载体,与脂质体转染剂以佳配比复合,转染传代3~5代的大鼠主动脉细胞,于转染后24 h、48 h、72 h在倒置荧光显微镜下检测转染效率,采用RT-PCR法检测AGT mRNA的表达水平,应用BCA蛋白定量试剂盒来测定大鼠内皮细胞的蛋白浓度,应用Wwestern blot法检测转染前和转染后的大鼠主动脉内皮细胞 AGT 的蛋白表达. 结果 ( 1 )当质粒与脂质体转染剂TMETAFECTENE EASY+以1:4的佳配比复合时,转染48 h时细胞转染效率高为(67.25 ±2.49)%. (2)空白对照组、阴性对照组与干扰组转染后的大鼠主动脉内皮细胞的AGT mRNA相对表达量分别为100%、98.4%和24.3%,且干扰组的AGT mRNA相对表达量明显低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05). (3)大鼠内皮细胞的蛋白浓度的标准曲线方程为y=0.4563x,所提取的大鼠主动脉内皮细胞AGT的蛋白含量为0.0456~0.9126μg/μl. (4)转染pAGT-shRNA1、pAGT-shRNA2、pAGT-shRNA3、pAGT-shRNA4的AGT蛋白表达量分别为(0.11 ±0.02)、(0.12 ±0.03)、(0.14 ±0.01)、(0.14 ±0.08);与空白对照组(0.58 ±0.07)和阴性对照组(0.52 ±0.04)相比,干扰组的AGT蛋白表达受到了明显的抑制(均P<0.05),抑制率分别为81.1%、79.3%、75.8%和75.9%. 4种不同靶位点的质粒载体所干扰的表达之间无明显差异(均P>0.05). 结论携带AGT基因特异shRNA编码序列的质粒载体pAGT-shRNA可以通过RNA技术特异性抑制大鼠主动脉内皮细胞的AGT基因的表达,为治疗缺血性脑血管疾病提供新的治疗方法.
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